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Epicentre 公司> Epicentre 公司促销产品>TargetAmp™ RNA 扩增试剂盒 常见问题 1． 用TargetAmp试剂盒扩增RNA时用什么方法提取总RNA比较好？ 多种方法提取的细胞总RNA都可以成功的用TargetAmp RNA扩增试剂盒来扩增。 包括盐析（比如EICENTER’S的ArrayPure™ 和 MasterPure™ RNA纯化试剂盒），RIzol® / TRI 试剂和离心纯化柱等。但是，很重要的一点是纯化的RNA产物中不能含有抑制RNA扩增反应所需要的酶活性的物质，如盐、金属离子、乙醇和苯酚等。关于RNA纯化的详细信息可以参考随试剂盒提供的TargetAmp Kit产品文献或者访问我们的主页。（www.epibio.com）。 2． 我什么时候该使用TargetAmp 1-Round kit ，什么时候该使用TargetAmp 2-Round Kit?
当您要从25-500 ng的总RNA中来扩增目的RNA时你可以选用
TargetAmp 1-Round kit；当您要从10-500 pg的总RNA中来扩增目的RNA时你可以选用TargetAmp
2-Round Ki。关于如何选择的详细信息可以参见http://www.epibio.com/targetamp/targetamp_selection_guide.asp。 3． 我可以按比例增加或减少 TargetAmp扩增反应的体系吗？
我们建议您不要按比例增加或减少 TargetAmp扩增反应的体系。这个体系是最优化的，如果您改变体系，您就可能会损失一些样品或者得到的产量较低。 4． EICENTER公司为什么推荐cDNA第二条链合成的温度为65℃？其它商业试剂盒和文献都用16℃。
TargetAmp试剂盒中用我们公司独有的，采用获得专利的高速、热稳定的DNA聚合酶来进行cDNA第二条链的合成，而不是一般的嗜温酶。 5． 在第二轮进行cDNA第一条链的合成时EICENTER公司为什么推荐使用SuperScript
II而不用SuperScript
III？ 应用高温反转录（SuperScript
III）可以获得更多的全长的cDNA, 应用SuperScript
II可以得到更高的产量，在第二轮扩增时，我们希望得到的是高产量，所以在第二轮，我们推荐使用SuperScript
II。 6．
应用TargetAmp RNA扩增试剂盒时在哪些步骤我可以停下来？ 第二条cDNA链合成后、体外转录RNA的DNase处理后（aRNA纯化前）和
aRNA纯化后都可以停下来。如果您选择在cDNA停下来的话，您可以将您的样品保存在－20℃。我们通常把我们的aRNA样品保存在－80℃。 7． 如果我增加体外转录反应的次数，会有什么好处吗？ 没有。体外转录反应的次数已经过优化，能产生最大量的长片段的aRNA。如果增加反应的次数，NTP池中NTP的含量会显著下降，而这会导致短片段aRNA产物。 8． 在我完成了一轮扩增或者两轮扩增的程序之后，纯化aRNA或者aminoallyl-aRNA的最好的方法是什么？ 纯化柱的使用取决于您的aRNA或者aminoallyl-aRNA的预计产量。如果预计产量小于40
ug，您可以选用Qiagen
MinElute Cleanup Kit (Qiagen cat. no. 74204)来纯化aRNA或者aminoallyl-aRNA。如果产量大于40
ug，可以用Qiagen
RNeasy Mini Kit。详细信息可以参阅TargetAmp产品文献。 9． 如果我在一个热循环仪上来进行体外转录反应，反应结束时我能让仪器保持4℃过夜，第二天再接着进行aRNA的纯化吗？ 可以，我们通常就是这样做的。 10. 在aRNA纯化步骤中提到：“利用真空泵将离心管中的残存液体抽干”。如果我们没有真空泵，可以通过加长离心时间来代替真空抽干吗？ 可以。延长离心时间1－2分钟，观察离心管是否干燥，在管的内表面没有水滴即可。 11．与其它方法直接标记NTP（生物素标记NTP，Cy-NTP或者荧光染料标记NTP） 体外加入转录过程相比，直接产生aminoallyl-aRNA这种方法有什么优点？ 这种间接标目的核酸的aminoallyl方法，正在变得流行起来，因为它相对直接加入生物素或者荧光标记NTP
的方法来说具有更大的优点。包括以下几个方面：
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